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〈以甲醇在清洗管柱時〉-【管柱分析應用-討論區-www.coi.tw 】

作者 : afu
性別 : 男
文章主題 : 以甲醇在清洗管柱時 人氣指數 : 7581
發表時間 :2010/1/19 下午 03:31:30   


對不起請問一下
我在做HPLC時
以甲醇在清洗管柱時, UV檢測器的數值會上下據烈的跳動由0.9X到-0.9X!!!
為何會這樣呢?
在先前進行試驗時不會如此,但最近會發生如此怪異現象!?
是樣品的問題?
是沖提溶劑的問題?
是管柱的問題?
還是UV檢測器的問題?
能否麻煩幫我解答, 感激不盡!!
謝謝

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發表時間 : 2010/1/19 下午 03:32:32  
回應者 : 吳健三
性別 : 男
這是第 1 篇回應文章
 
您起始移動相為水:甲醇=10/90,60分鐘後改變為水:甲醇=90/10,不論Isocratic或Gradient作法,移動相由高溶洗的甲醇比例,降為低甲醇比例,似乎不符合逆相層析法,C18,C8...操作法則。
請您再確定一次移動相內容比例增變條件,再討論。

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發表時間 : 2010/1/19 下午 03:33:24  
回應者 : afu
性別 : 男
這是第 2 篇回應文章
 
如果我的水:甲醇=10:90, 60分鐘後為水:甲醇=90:10, 流速為0.8ml/min, 而你所說的120ml是應洗多久才可以呢,因為我的管柱已洗了好久了,可是一直洗不乾淨, 問題一直存在著,那該怎麼做?繼續洗, 還是換支管柱, 還是有其他方法??

謝謝

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發表時間 : 2010/1/19 下午 03:34:31  
回應者 : 吳健三
性別 : 男
這是第 3 篇回應文章
 
您可能採用C18或C8...逆相層析管柱,您沒有提到最後分析的移動相的內容與比例,因此我們猜想:
1.假使你最後分析移動相只是甲醇(乙晴)與水調和,(沒有酸、鹽調和)結束分析,用甲醇流洗層析管柱,在檢測出現混亂"吸收值Absorbance",說明您注入分析,當時的移動相未能將分析物全部溶洗帶出,當時殘存被保持於管柱內。當高溶洗的甲醇,流洗時,則將之該等殘存持續溶洗出,在檢測器一時出現混亂吸收值。按一般甲醇流洗約120ml,大致上可將管柱流洗乾淨,而有穩定的吸收值。
2.假使您最後移動相是水相調和酸,或鹽類、分析畢,直接甲醇流洗,非常不好,此時吸光值仍然是混亂值,建議您先用MeOH/H2O=20/80先流洗約120ml,再將甲醇流洗約120ml即可。基本上,您所擔心的,那些都不是問題。

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發表時間 : 2010/1/19 下午 03:35:27  
回應者 : 吳健三
性別 : 男
這是第 4 篇回應文章
 
若您在甲醇/水=90/10之高有機移動相之下,某些分析物仍會殘存層析管柱,建議您分析畢用,甲醇/THF=50/50,流洗約100ml,再以甲醇流洗,約50ml即可。

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