作者 : afu

性別 : 男

對不起請問一下 我在做HPLC時 以甲醇在清洗管柱時, UV檢測器的數值會上下據烈的跳動由0.9X到-0.9X!!! 為何會這樣呢? 在先前進行試驗時不會如此,但最近會發生如此怪異現象!? 是樣品的問題? 是沖提溶劑的問題? 是管柱的問題? 還是UV檢測器的問題? 能否麻煩幫我解答, 感激不盡!! 謝謝 [ 我要回應 ] -> 以甲醇在清洗管柱時

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發表時間 : 2010/1/19 下午 03:32:32

回應者 : 吳健三

性別 : 男

您起始移動相為水:甲醇=10/90，60分鐘後改變為水:甲醇=90/10，不論Isocratic或Gradient作法，移動相由高溶洗的甲醇比例，降為低甲醇比例，似乎不符合逆相層析法，C18,C8...操作法則。 請您再確定一次移動相內容比例增變條件，再討論。 [ 我要回應 ]

發表時間 : 2010/1/19 下午 03:33:24

回應者 : afu

性別 : 男

如果我的水:甲醇=10:90, 60分鐘後為水:甲醇=90:10, 流速為0.8ml/min, 而你所說的120ml是應洗多久才可以呢,因為我的管柱已洗了好久了,可是一直洗不乾淨, 問題一直存在著,那該怎麼做?繼續洗, 還是換支管柱, 還是有其他方法?? 謝謝 [ 我要回應 ]

發表時間 : 2010/1/19 下午 03:34:31

回應者 : 吳健三

性別 : 男

您可能採用C18或C8...逆相層析管柱，您沒有提到最後分析的移動相的內容與比例，因此我們猜想: 1.假使你最後分析移動相只是甲醇(乙晴)與水調和，(沒有酸、鹽調和)結束分析，用甲醇流洗層析管柱，在檢測出現混亂"吸收值Absorbance"，說明您注入分析，當時的移動相未能將分析物全部溶洗帶出，當時殘存被保持於管柱內。當高溶洗的甲醇，流洗時，則將之該等殘存持續溶洗出，在檢測器一時出現混亂吸收值。按一般甲醇流洗約120ml，大致上可將管柱流洗乾淨，而有穩定的吸收值。 2.假使您最後移動相是水相調和酸，或鹽類、分析畢，直接甲醇流洗，非常不好，此時吸光值仍然是混亂值，建議您先用MeOH/H2O=20/80先流洗約120ml，再將甲醇流洗約120ml即可。基本上，您所擔心的，那些都不是問題。 [ 我要回應 ]

發表時間 : 2010/1/19 下午 03:35:27

回應者 : 吳健三

性別 : 男

若您在甲醇/水=90/10之高有機移動相之下，某些分析物仍會殘存層析管柱，建議您分析畢用，甲醇/THF=50/50，流洗約100ml，再以甲醇流洗，約50ml即可。 [ 我要回應 ]

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